Diabetologia：激活但功能受损的记忆Tregs在1型糖尿病患者的发展缓慢的过程中逐渐扩展

从第一次用到家兔自身基因表达到用到1改型肾病诊疗呕吐的令人满意率在老年人后期就有很好的叙述，多个家兔自身基因表达感染性的老年人当中有70%在肝细胞转换后10年内患上肾病，而随访15年的老年人这一%上升到84%。比起之下，占诊疗1改型肾病一半以上的改型1改型肾病的胃癌机制还并未获取充分的科学研究。

更为多的人开始应用于再行系统来定义1改型肾病的令人满意：形态在用到多种家兔自身基因表达时重回第1阶段，用到皮质醇极度时重回第2阶段，用到呕吐时重回第3阶段。一些多发家兔自身基因表达感染性的形态，在1期和2期，令人满意较极快，并工业发展为胃癌的1改型肾病。我们在此之后叙述了一一个大在首次验证到多种家兔自身基因表达试样后至少10年无肾病的快得多令人满意者，这一个大病症人数少，但特征来得明确。随后，我们发现家兔自身淋巴细胞基因表达CD8+T细胞会反应在令人满意较快的病症当中基本不存在，但在近期胃癌和或多或少的肾病病症当中很较难验证到。这有可能暗示，与令人满意病症比起，这些病症自身免疫系统的通气增强。

早期科学研究暗示，尽管通气性T细胞会(Treg)数量但会，但肾病病症存在一些机能缺陷，其当中包括对IL-2的反应意志力提高。此外，肾病病症当中的effectCD4+T细胞会有可能对通气愈来愈具抵抗性，展现出为effectT细胞会的依赖性消退，自然造成的Treg和形体外造成的可借Treg，以及淋巴细胞经历的CD4+T细胞会当中IL-2反应消退。本科学研究的目的是叙述了CD4+通气性T细胞会(Treg)在一小群极较快令人满意者当中的特征，他们的同期为43岁(31-72岁)，随访时间为18-32年。

法则：BOX科学研究是一项以这群人依此的纵向科学研究，在21岁都有确诊的病症子女当中检查1改型肾病的凶险因素。我们在此之后叙述了长期较快令人满意者的特征，他们保持多重家兔自身基因表达感染性少于10年，但并未用到肾病的诊疗呕吐，极快性或非变性自身免疫。随后，10名此后保持无肾病并愿意透过大量血液试样的较快令人满意者纳入T和B细胞会机能数据分析。在以外的科学研究当中，8名极快令人满意者(SP一个大)，当中位年龄43岁(31-72岁)，18 - 32岁之间的家兔自身基因表达感染性。所有的举例来说都始终保持1改型肾病令人满意的1期，尽管一些人随后失去了家兔自身基因表达对某些淋巴细胞的感染性反应，然而，一名病症早已始终保持2期至少6年，但并未用到诊疗呕吐，一名病症被诊断为肾病，该受试者72岁，在收集测试试样时，其HbA1c升高到53 mmol/mol(7%)，在生物信息学当中对该丝氨酸顺利完成了分开评估。裂解外周血单个核细胞会(PBMCs)，转用多常量流式细胞会法术和T细胞会依赖性实验评估丝氨酸当中Treg的Hz、表改型和机能。应用于FlowSOM和CITRUS(聚类断定、表征和转回)顺利完成无督导聚类数据分析，评估Treg表改型。

结果：与心理健康丝氨酸比起，来自极快令人满意形体的无意识CD4+T细胞会的督导聚类表明，诱导的无意识CD4+ TregHz上升，与抑制作用可借的TNFR涉及蛋白(GITR)理解上升有关。一名HbA1c升高的病症与令人满意较快者和匹配的折衷一个大比起，Treg小曲各不相同。机能新发现，与心理健康丝氨酸比起，来自较快令人满意形体的Treg介导的CD4+effectT细胞会依赖性明显受损。展现出为对effectCD4+T细胞会CD25和CD134理解的依赖性上升。

示意图1 系统地的表改型数据分析表明，CD4+Treg亚改型在极快令人满意数据流当中上升。由FlowSOM降解的Treg寝室，有数在来自所有丝氨酸的能活CD4+CD45RA -细胞会上。根据上面物理解断定出10个元簇:无意识T细胞会_1;无意识T cell_2;无意识T cell_3;无意识T cell_4;CD49b无意识T细胞会;HLA-DR + GITR +无意识T细胞会;缓存Treg_1;缓存Treg_2;缓存Treg_3;和缓存Treg_4。(a)应用于9个不同Treg上面降解的10个元簇的MST。每个键值代表一个空降兵(100个空降兵)，愈来愈大的元空降兵(10个元空降兵)在键值一个大周围上色。每个键值当中的饼示意图指出单个上面的理解级别。(b)每个元聚类的热示意图，以表明整形体上面理解。(c, d)为HD一个大(c)和SP一个大(d)降解示意图，以及FlowSOM识别系统的每个元簇的覆盖层。(e-l)相比之下重元素为每个metacluster盒相示意图(重元素> 0.05%)确定为HD和SP一个大:缓存Treg_2 (e),缓存Treg_3 (f),缓存Treg_4 (g), HLA-DR + GITR +无意识T细胞会(h)、无意识T cell_1(i),无意识T cell_2 (j),无意识T cell_3 (k) n d CD49b无意识T细胞会(l)。橘色左上方代表**SP 606。**p< 0.01, Wilcoxon以此类推符号秩核查。此键适用于示意图形部分(a)， (c)， (d)和d (e-l)

示意图2 应用于CITRUS的预测模改型声称，TregHz的上升是令人满意较快的标识。分级门控(a - f)和甜菜数据分析(g-k)来得SP举例来说和匹配的HD举例来说在CD4+CD45RA−T细胞会上的差异。(a)亲本CD25+ cd127 lotreg和CD25loCD127+T c e l个形体的代表性示意图。CD25+ cd127lotreg被CD39和FOXP3钼，然后通过HLA-DR和GITR理解顺利完成裂解，模拟FlowSOM个形体。(b) HD(黑点)和SP(蓝点)一个大以及丝氨酸SP 606(橘色)当中CD25+ cd127的Hz统计示意图。(c-f) CD25+CD127loCD39+FOXP3+和CD25loCD127+门控子集的盒相示意图;(c) HLA-DRloGITR−(缓存Treg_2)， (d) HLA-DRintGITRlo(缓存Treg_3)， (e) HLA- d RhiGITR+(缓存Treg_4)， (f) HLA- d RhiGITR+(HLA-DR+GITR+缓存T cell)。(g - i)甜菜簇球状由(g) CD127， (h) CD25和(i) FOXP3理解准确度着色，箭头引人注目的簇被识别系统为SP和HD数据流之间的不同。(j)盒相示意图表明了在SP(蓝点)和HD(灰点)一个大当中，CITRUS无意识Treg_3和Treg_4的相比之下重元素(%)。(k)直方示意图表明每个簇的表改型(粉红色)和Treg上面相比之下理解与时代背景理解(蓝色);上列，缓存Treg_3;下面一行，缓存Treg_4。时代背景与所有其他簇当中上面的理解有关。*p< 0.05， **p< 0.01, Wilcoxon以此类推符号秩核查

示意图3 与心理健康献血者比起，令人满意较快者无意识treg的GITR上升。每个无意识CD4+T细胞会元簇(无意识T细胞会_1;无意识T cell_2;无意识T cell_3;CD49b +无意识T细胞会;HLA-DR + GITR +无意识T细胞会;缓存Treg_2;缓存Treg_3;来自FlowSOM的memory Treg_4)验证每个理解上面的变化。(a,b)来自HD (a)和S (b)数据流的理解热示意图(sp606不包括在内)。(c,d)无意识Treg_4元簇当中所有HD(灰色)、所有SP(蓝色)和SP 606(橘色)的FlowSOM GITR理解串联，表明直方示意图(c)和统计示意图(d)。Wilcoxon以此类推符号秩和核查，p< 0.07(橘色)所有丝氨酸包括，p< 0.05(蓝色)丝氨酸SP 606和匹配的HD不包括在测试当中。(e,f) HLA-DRhiGITR+Tregs当中GITR理解，从分级门控，从所有HD(灰色)、所有SP(蓝色)和SP 606(橘色)串联，表明直方示意图(e)和统计示意图(f) *p< 0.05, Wilcoxon以此类推符号秩核查

示意图4 来自较快令人满意的CD4+ treg细胞会控制effectCD4+T细胞会的意志力提高。SP一个大用蓝色的线和左上方指出，HD一个大用蓝色的线和左上方指出，橘色的线/左上方指出丝氨酸sp606。应用于CD4+CD25+ Treg分选试剂盒对CD4+T细胞会顺利完成分选。CD4+CD25−(接收者者)被上面为CFSE, Treg按判读的%试样。用抗CD3 /28微珠增殖细胞会，培育3翌日顺利完成流式细胞会法术验证。(a-d)与CD4+接收者者相比之下应的treg培育(内皮)(e-h) HD、SP或SP 606 Treg与HD接收者者培育。(a,b,f) CFSE游离(a,e)和CFSE依赖性百份(b,f)。(c, d,h) CD25 (c,g)和CD134 (d,h)的依赖性百份。应用于感染性折衷(诱导的响应细胞会不含treg)计算依赖性百份。*p< 0.05， **p< 0.01， ***p< 0.001，重复测量双向方差数据分析。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重来得测试

示意图5 effectCD4+T细胞会对较快令人满意的T细胞会增殖的依赖性愈来愈引人注目。SP一个大用蓝色的线和左上方指出，HD一个大用蓝色的线和左上方指出，橘色的线/左上方指出丝氨酸sp606。应用于CD4+CD25+Treg分选试剂盒对CD4+T细胞会顺利完成分选。CD4+CD25−(接收者者)被cfsel上面，treg按判读的%试样。用抗CD3 /28微珠增殖细胞会，培育3翌日顺利完成流式细胞会法术(CD25反染)和细胞会因子数据分析。HD Treg与HD、SP或sp606接收者者共同培育。(a,b) CFSE游离(a)和CFSE依赖性前年(b)。(c,d) CD25依赖性前年(c)和CD134依赖性前年(d)。(e,f) IFN-γ(e)和IL-17A (f)在共培育当中的理解。***p< 0.001， **p< 0.01，重复测量双向方差数据分析。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重来得测试

假设：我们给出的假设是，来自较快令人满意子的增殖无意识CD4+Treg在GITR理解当中获取了扩展和来得丰富，强调了不足之处科学研究Treg在1改型肾病安全性形态当中的一般而言的不足之处。

原文出处：

Boldison J, Long AE, Aitken RJ,et al.Activated but functionally impaired memory Tregs are expanded in slow progressors to type 1 diabetes.Diabetologia 2021 Oct 28